Le Grand-duc d’Amérique est un prédateur au sommet, ce qui signifie qu’il se situe au sommet de la chaîne alimentaire et n’a pas de prédateurs naturels. Cependant, il existe quelques espèces connues pour s'attaquer au grand-duc d'Amérique.
Aigles royaux : Les aigles royaux sont de grands oiseaux de proie puissants qui chassent une variété d’animaux. Le grand-duc d’Amérique est l’une de ses proies. Les aigles royaux chassent généralement en planant au-dessus des zones ouvertes, puis en plongeant pour capturer leurs proies.
Autour des palombes : L'autour des palombes est un autre grand oiseau de proie qui chasse le grand-duc d'Amérique. Les autours chassent généralement en se perchant dans les arbres, puis en tendant une embuscade à leurs proies.
Chouettes lapones : Les chouettes lapones sont de grandes chouettes puissantes qui chassent une variété d'animaux. Le grand-duc d’Amérique est l’une de ses proies. La chouette lapone chasse généralement en volant silencieusement à travers la forêt, puis en tendant une embuscade à ses proies.