La voie de la glycolyse peut être divisée en 3 étapes/phases principales :
Phase préparatoire : Dans cette étape initiale, une molécule de sucre à 6 carbones (généralement du glucose) est phosphorylée deux fois pour former du fructose-1,6-bisphosphate. Ce processus nécessite l'apport de 2 molécules d'ATP et utilise les enzymes hexokinase et phosphofructokinase.
Phase de clivage : Au cours de cette étape, le fructose-1,6-bisphosphate est scindé en deux sucres à 3 carbones :le glycéraldéhyde-3-phosphate (GAP) et le phosphate de dihydroxyacétone (DHAP). Ces 2 molécules sont interconvertibles et peuvent toutes deux progresser plus loin dans la voie.
Phase de paiement : Cette dernière étape implique la conversion du GAP et du DHAP en pyruvate, générant ainsi de l'ATP et du NADH. Cette étape comprend plusieurs étapes enzymatiques, notamment des réactions de phosphorylation et d’oxydation au niveau du substrat. En fin de compte, 2 molécules de pyruvate sont produites avec un total de 4 molécules d'ATP et 2 molécules de NADH pour chaque molécule de glucose qui entre dans la glycolyse.